Нии эпидемиологии гепатиты

Нии эпидемиологии гепатиты

Отдел медицинской микробиологии

Руководитель отдела — академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор В.А.Зуев

Отдел создан в 1979 г. на основе ряда лабораторий, объединенных общим направлением — исследованием процесса персистенции возбудителей инфекционных заболеваний и механизмов, определяющих его роль в генезе острой, латентной, хронической и медленной форм инфекции. Исследования проводятся на возбудителях различных таксономических групп: бактериях, хламидиях, микоплазмах и вирусах.

Отличительной чертой последних лет работы отдела является, с одной стороны, разработка фундаментальных проблем патогенеза инфекционного процесса, с другой — все более широкое использование в клинике результатов исследований, связанных с совершенствованием диагностики, профилактики и лечения различных инфекционных заболеваний.

Лаборатория микробиологии латентных инфекций

Руководитель лаборатории — академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор В.А.Зуев.

Основные направления исследований — вирусная персистенция и медленные вирусные инфекции человека и животных.

В лаборатории описана латентная форма гриппозной инфекции в клеточных культурах, вскрыт механизм вирусной персистенции в клетках, обусловленный нарушением сборки вирусных рибонуклеопротеидов, установлена зависимость формы инфекционного процесса в клеточных культурах от соотношения в заражающем препарате вируса гриппа дефектных и стандартных вирионов и множественности заражения.

Впервые установлена возможность формирования латентной гриппозной инфекции в организме млекопитающих всеми известными в природе путями: после перенесенного заболевания, благодаря заражению живым вирусом и в результате вертикальной передачи вируса. В эксперименте на животных открыто не известное ранее свойство вируса гриппа вызывать в результате внутриутробного заражения плода развитие у потомства мышей медленной формы инфекционного процесса. Вскрыт иммунологический механизм развития такой медленной гриппозной инфекции, обусловленный нарушением синтеза макрофагами интерлейкина 1, и молекулярный механизм дегенеративных изменений в органах и тканях, обусловленный повреждающим действием на клетки поверхностного вирусного белка — нейраминидазы. На основании клинико-лабораторных обследований детей с признаками медленно прогрессирующей энцефаломиопатии получены доказательства персистенции у них в организме вируса гриппа в дефектной форме.

Обнаружено сходство в характере патоморфологических изменений в мозговой ткани мышей при медленной гриппозной инфекции с изменениями, описанными при прионных болезнях человека и животных: гибель нейронов, формирование губкообразного состояния и глиоз.

Учитывая хорошо известное сходство этих изменений с изменениями в стареющем мозге, в последние годы предприняты исследования роли глии в механизме старения и гибели мозга. Показано накопление в стареющем мозге млекопитающих (мышей) фактора цитопролиферативной активности, резко стимулирующего размножение глиозных клеток как в первично диссоциированных, так и в перевиваемых культурах клеток. Указанный фактор обнаружен также в сыворотке крови стареющих млекопитающих и человека. Его активность четко регистрируется, начиная с конца первой трети видовой продолжительности жизни организма. Фактор высоко устойчив к действию трипсина, температуре и обладает видовой специфичностью.

На основании полученных данных сформулирована новая концепция старения и гибели мозга, обусловленных накоплением с возрастом в мозговой ткани цитопролиферативного фактора, активно стимулирующего пролиферацию глии, тем самым приводящего к нарушению трофики нейронов, что, в свою очередь, может служить причиной их гибели и, в конечном счете, причиной гибели мозга и организма в целом.

Лаборатория микоплазм и Л-форм бактерий

Руководитель лаборатории — доктор биологических наук И.В.Раковская.

Основные направления исследований посвящены изучению механизмов патогенности и длительной персистенции микоплазм в зараженном организме. Для этого созданы экспериментальные модели урогенитального и респираторного микоплазмозов, ревматоидного артрита микоплазменной этиологии, смешанных микоплазма-вирусных инфекций. Изучены некоторые иммунологические механизмы «ускользания» микоплазм от иммунного надзора хозяина. В настоящее время изучаются молекулярно-генетические механизмы персистенции микоплазм.

Показано, что при хроническом респираторном микоплазмозе происходит выключение экспрессии ряда генов, в том числе гена, кодирующего адгезин PI — основной фактор патогенности микоплазм. Изучен механизм и динамика этого процесса. Разработан метод, позволяющий выявлять при хроническом течении инфекции персистирующие микоплазмы, не выявляемые рутинными методами, в том числе и ПЦР при общепринятом способе выделения ДНК. Проводятся исследования сравнительной патогенности различных сероваров М.urealyticum.

На базе лаборатории функционирует Центр Минздрава России по микоплазмозам, выполняющий следующие практические задачи:

  • проведение анализа заболеваемости населения;
  • разработка и совершенствование методов диагностики;
  • разработка методических документов по диагностике;
  • оказание консультативно-методической помощи сотрудникам Госсанэпиднадзора и различных организаций Минздрава России.

В ходе выполнения этих задач в лаборатории разработан комплекс диагностических методов, проведена их сравнительная оценка и создан ряд диагностических наборов для выявления микоплазм методом иммунофлюоресценции:

  • «МикогомоФлюоскрин»,
  • «УреагениФлюоскрин»,
  • «МикопневмоФлюоскрин».

Кроме того, созданы диагностикумы для выявления антител к М.hominis и М.pneumoaiae с помощью иммуноферментного анализа, а также — для выявления урогенитальных микоплазм методом ПЦР.

С помощью указанных диагностикумов и комплекса диагностических методов в лаборатории ежегодно обследуются не менее 7000-8000 больных с воспалительными заболеваниями урогентитального тракта и органов дыхания. Лаборатория постоянно принимает участие в расшифровке вспышек пневмоний среди различных контингентов больных в разных регионах России.

Лаборатория располагает музеем микоплазм и набором гипериммунных сывороток, которые постоянно пополняются. Лаборатория ежегодно проводит семинары для работников здравоохранения. В лаборатории постоянно проходят обучение врачи-лаборанты и научные сотрудники из разных учреждений страны. Выпускаются методические рекомендации по диагностике микоплазменных инфекций и практические руководства для врачей.

Лаборатория легионеллеза

Руководитель лаборатории — доктор биологических наук, профессор И.С.Тартаковский.

Основные направления исследований — изучение регуляторных механизмов, контролирующих экспрессию факторов патогенности на разных стадиях взаимодействия внутриклеточного бактериального паразита с клеткой-хозяином. Основными моделями, используемыми в исследованиях лаборатории, являются факультативные внутриклеточные паразиты — Legionella pneumophila и Listeria monocytogenes.

На модели легионелл в лаборатории впервые были выделены и охарактеризованы: цитолизин (главный секреторный белок легионелл с выраженной цитотоксической и гемолитической активностью) и УДФ-глюкозилтрансфераза, активность которой коррелирует с клинической значимостью выделяемых штаммов. Установлено, что выявленные ферменты специфически инактивируют компоненты сигнал-проводящих путей эукариотических клеток. УДФ-глюкозилтрансфераза модифицирует 40-45 кД актин-подобные белки цитоскелета макрофагоподобных клеток путем ковалентного присоединения к мишеням остатка глюкозы. Цитолизин воздействует на протеинкиназную активность эукариотов путем специфического расщепления фосфорилируемых эукариотических белков.

На модели листерий впервые установлено, что экспрессия факторов патогенности L.monocytogenes находится под негативным контролем, осуществляемым низкомолекулярным аутокринным сигналом, продуцируемым листериями и накапливающимся в культуральной среде в процессе роста. Получена коллекция мутантных штаммов листерий с дефектами с системе негативной ауторегуляции, с конститутивной гиперпродукцией факторов патогенности в результате точечных аминокислотных замен в последовательности регуляторного белка PrfA, с нарушениями отдельных функций внутриклеточного размножения. Открыт феномен внутриклеточного накопления синтезированных факторов патогенности с последующей массированной их секрецией. Разработаны методические подходы, позволяющие оценить уровень экспрессии отдельных факторов патогенности листерий.

Наряду с фундаментальными, в лаборатории ведутся и прикладные исследования. Так, в связи с введением Минздравом РФ гигиенических нормативов, строго регламентирующих содержание патогенных листерий в продуктах питания, в лаборатории разрабатываются для санитарно-эпидемиологической службы страны быстрые и недорогие методы идентификации и типирования возбудителей. Показано, что ПЦР с праймерами, направляющими амплификацию фрагмента гена р1сА, и оригинальный бактериологический метод, основанный на сравнении лецитиназной активности культуры в присутствии активированного угля, в значительной степени повышают надежность и эффективность быстрой идентификации L.monocytogenes.

По заданию Правительства Москвы для снижения риска контакта с возбудителем и возможного заражения легионеллами населения разрабатываются принципы микробиологического мониторинга, санитарно-гигиенической оценки и дезобработки технических средств централизованной очистки и кондиционирования воздуха помещений в г. Москве.

Лаборатория является Центром Минздрава РФ по легионеллезу, активно сотрудничает с ВОЗ, входит в Европейскую рабочую группу по легионеллезу под эгидой ЕЭС, объединяющую лаборатории 25 стран и осуществляющую эпидемиологический мониторинг болезни легионеров в Европе.

По проблеме листериоза лаборатория участвует в международном проекте ЕЭС (INTAS-2000-0471) «Основы рационального контроля пищевого листериоза: паневропейская инициатива».

Лаборатория бруцеллеза

Руководитель лаборатории — кандидат медицинских наук М.М.Желудков.

Основные направления исследований — эпидемиология бруцеллеза, изучение возбудителя инфекции, разработка и усовершенствование методов лабораторной диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза.

В лаборатории проводится систематический анализ заболеваемости людей бруцеллезом, слежение за эпидемиологической ситуацией в Российской Федерации и на отдельных ее территориях на основе существующей системы отчетности и получаемых в лаборатории собственных данных. Проводится мониторинг временной и пространственной динамики этиологической структуры бруцеллеза с целью прогноза эпидситуации и своевременной коррекции системы контроля.

По проблеме совершенствования диагностики бруцеллеза основное внимание уделяется изучению эффективности использования метода ПЦР в диагностике различных форм бруцеллеза людей и эпидемиологической практике. Исследования проводятся на различных контингентах — больные острой и хронической формами бруцеллеза, контактирующие с культурами возбудителей бруцеллеза сотрудники лабораторий, рабочие предприятий по переработке продуктов животноводства. В результате исследования изучена корреляционная зависимость ПЦР и серологических тестов.

С целью повышения информативности критериев в идентификации и дифференциации представителей рода Brucella в лаборатории используется сравнительный анализ профилей белков в полиакриламидном геле (ДСН-ПААГЭ), а также анализ антигенов бруцелл, реагирующих с IgG антителами в иммуноблоте с набором специфических S— и R-антисывороток. Исследования показали сходство белковых профилей у видов бруцелл в отличие от близкородственных бактерий, а иммуноблот-анализ позволил проводить видовую идентификацию штаммов бруцелл. При этом использование S-антисывороток позволило дифференцировать штаммы видов В.melitensis, В.suis, В.abortus, В.neotomae, находящиеся в S-форме, от видовых штаммов В.canis и В.canis, находящихся в R-форме. Практическое значение этих методов было показано при сравнительном изучении в комплексе с традиционными методами идентификации бруцелл 10 полевых штаммов, выделенных от больных собак. У всех выделенных штаммов проявлялась идентичность картины белковых профилей и иммунодоминантных антигенов с референтным штаммом B.canis RM6/66. Это позволило уточнить таксономическую принадлежность штаммов к виду В.canis.

Проводится также сравнительное изучение чувствительности к кислотному шоку (рН ниже 4,0) у референтных и вакцинных штаммов бруцелл, различающихся по видовой принадлежности и патогенным свойствам, а также определение способности повышать устойчивость к кислотному шоку после предварительной адаптации в мягких рН-5,6 (феномен, известный в литературе как ATR-адаптивный ответ). Полученные результаты показали, что высокопатогенные виды В.suis (1 биовар) и В.melitensis (3 биовар) более чем в 100 раз устойчивы к кислотному шоку по сравнению со слабопатогенным видом В.canis и непатогенным для человека В.neotomae.

Видовые своеобразия бруцелл в их чувствительности к кислотному шоку и способности к ATR-адаптивному ответу необходимо учитывать при паспортизации штаммов бруцелл и прежде всего вакцинных, у которых отмечается повышенная чувствительность к кислотному (рН 3,0-3,3) шоку.

Лаборатория индикации

Руководитель лаборатории — член-корреспондент РАЕН, доктор медицинских наук, профессор М.И.Михайлов.

Основные направления исследований — разработка современных методов лабораторной диагностики вирусных гепатитов, принципов их рационального применения и создание систем внешнего контроля качества; изучение особенностей эпидемиологии вирусных гепатитов, присущих периоду резкого подъема заболеваемости; разработка тактики и стратегии вакцинопрофилактики гепатитов В и А, а также рациональной системы пред- и поствакцинального скрининга; поиск и изучение распространения новых вирусов, претендующих на этиологическую роль в возникновении гепатита.

В лаборатории впервые в России разработана и апробирована система внешнего контроля качества выявления HBsAg, анти-ВГС и РНК ВГС, которая реализуется в рамках Федеральной системы контроля качества клинических лабораторных исследований.

Установлена возможность полового пути передачи вируса гепатита С. Получены новые данные о широте и особенностях распространения ВГС среди: семейных пар; лиц, занимающихся проституцией; детей и подростков, подвергнутых сексуальному насилию и вовлеченных в проституцию. Эти данные позволили установить наличие полового пути передачи в период подъема заболеваемости острым и хроническим гепатитом С.

Совместно с Центром Госсанэпиднадзора Свердловской области и лабораторией эпидемиологии НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского разработана и апробирована современная тактика вакцинопрофилактики гепатита В, включающая вакцинацию новорожденных детей, подростков 13-14 лет и лиц, входящих в группы повышенного риска инфицирования, что позволяет в течение 2-3 лет реально снизить (в 5-6 раз) в регионе уровень заболеваемости острым гепатитом В.

Отработаны лабораторные варианты изготовления диагностических препаратов для выявления: РНК HGV, анти-HGV и ДНК TTV. При этом впервые установлена широта распространения HGV и TTV в различных регионах России и группах населения; изучены различные аспекты эпидемиологии TTV-инфекции; установлена возможность реализации полового пути передачи TTV; получены новые данные об отсутствии взаимосвязи TTV и возникновения гепатита.

Продемонстрировано широкое распространение ВГЕ среди населения неэндемичного региона. На этом основании высказано предположение о возможной реализации парэнтеральной передачи ВГЕ (или вируса, близкого к нему и имеющего перекрестную иммунологическую специфичность).

Лаборатория хламидиозов

Руководитель лаборатории — доктор биологических наук Н.А.Зигангирова.

Основные направления исследований: изучение биологии хламидий — облигатных внутриклеточных патогенных микроорганизмов прокариотной природы и вызываемой ими инфекционной патологии, а также разработка новых и усовершенствование существующих методов индикации возбудителей и диагностики хламидийной инфекции.

Разработан и широко используется прямой микроиммунофлюоресцентный метод определения хламидий с помощью моноклональных антител; разработаны и используются микроиммунофлюоресцентный и микроиммуноферментный методы на стеклах для определения IgG, IgM и IgA антител. Производится выпуск коммерческих тест-систем, основанных на этих методах; разрабатываются новые молекулярно-биологические методы определения чувствительности хламидий к антибиотикам.

Разрабатывается новая методология биочипов — для одновременного определения антител к различным хламидийным антигенам. Биочип представляет собой предметное стекло, в лунки которого нанесено множество разных точек с антигенами хламидий, которые в случае положительной реакции приобретают специфическую окраску.

Помимо указанных выше разработок, в лаборатории постоянно проводится диагностическая работа по определению хламидий в материале от больных методом заражения клеточных культур (золотой стандарт).



Источник: www.gamaleya.ru


Добавить комментарий